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爲您詳述預防細胞汙染及汙染後對策
发布时间:2019-07-17   点击次数:6次

(一)汙染清除方法

培養細胞一經汙染,多數較難處理。如果汙染細胞價值不大,宜棄之;在尋找原因後徹底消毒操作室,複蘇或重新購置細胞,再培養。  

汙染細胞價值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法清除。

 

1. 細菌和真菌的清除

抗生素對殺滅細菌較有效。聯合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比汙染後再用藥效果好。  

預防用藥一般用雙抗生素,汙染後清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥後作用24~48小時,再換常規培養液。此法在汙染早期有效。

 

2. 支原體的清除

(1)  用MRA处理

用MRA(Mycoplasma Removal Agent)处理细胞,每4天换一次液,连续处理15天以确保细胞纯洁健康,效果好。   

(2)  用清洗纯化法清除支原体污染的方法

細胞營養馴化→優質細胞群的篩選→細胞清洗→反複離心洗滌。

其原理是利用離心力、細胞、微生物質量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發酵支原體外多爲細胞外寄生,所以通過反複洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數量降低至極限.

如結合敏感抗生素的抑殺作用,可達到更好的效果。

(3)  药物辅助加温处理

先用藥物處理後,再將汙染的組織培養物放在41℃培養18小時,可殺死支原體,但對細胞有不良影響。

(4)  使用支原体特异性血清  

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體汙染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經抗血清處理後11天即轉爲陰性,並且5個月後仍爲陰性。

但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經濟。   

 

(二)汙染的預防

預防是防止細胞培養過程中發生汙染的辦法。只有預防工作做在前,才能將發生汙染的可能性降到小程度。  

 一般預防可從以下幾方面著手:

1、添加抗生素

2、從物品、用品消毒滅菌著手

細胞培養所用物品清洗、消毒要徹底,各種溶液滅菌除菌要仔細,並在無菌試驗陰性後才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。   

3、從操作者做起

(1)  進無菌室前要用肥皂洗手,按規定穿隔離衣。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

(2)  操作者动作要轻,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话,若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

(3)  操作時要常更換吸管,一旦發現吸管口接觸了手和其他汙染物品應棄去。實驗完畢用消毒水浸泡的紗布擦台面。

4、防止細胞交叉汙染

(1)  在進行多種細胞培養操作時,所用器具要嚴格區分。 

(2)  在进行换液或传代操作时,注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口,以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。   '

(3)  細胞一旦購置或從別處引入,均應及早留種凍存,一旦發生汙染可重新複蘇培養。

5、無菌室的徹底消毒 

(1)  0.1%新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室;

(2)  甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣休對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。

(3)  細胞培養,首先要避免汙染,但在細胞培養過程中,有了汙染用適當的方法清除,這樣也可以保證細胞培養的成功。  

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