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讓您了解感受態細胞的制作方法!!!
发布时间:2019-07-12   点击次数:7次

感受態細胞主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修複。

感受態細胞制作方法:

CaCl2法

1. 將快速生長的大腸杆菌置于經低溫(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成爲感受態細胞

細胞膜通透性發生變化,極易與外源DNA相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羟基-磷酸鈣複合物。

聯合其它的二價金屬離子(如Mn、Co)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,則可使轉化率提高100~1000倍。

2. 此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過複制、表達,實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。

3. 將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。

電轉法

電擊法不需要預先誘導細菌的感受態,依靠短暫的電擊,促使DNA進入細菌,轉化率zui高能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便,愈來愈爲人們所接受

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